Recoltarea si transportul esantionului Pentru a cultiva agenti patogeni bacterieni, micotici sau rali, un esantion adecvat trebuie plasat intr-un mediu favorabil cresterii (amplificare). Succesul sau esecul identificarii unui agent patogen microbian specific depinde deseori de procesul de recoltare si transport. Sectiune B enumera procedurile de recoltare si transport ale esantioanelor obisnuite. Deoarece exista multe paradigme pentru aceste proceduri, este important sa cerem sfatul laboratorului de microbiologie atunci cand exista dubii asupra unei situatii particulare.
Izolarea bacteriilor patogene Izolarea agentului patogen banuit, din materialul clinic, se bazeaza pe folosirea mediilor artificiale concepute pentru a intretine cresterea bacteriilor in tro. Aceste medii sunt compuse din agar, care nu este meolizat de bacterii si factori nutriti pentru a intretine cresterea speciei microbiene care ne intereseaza, deseori in combinatie cu substante care inhiba cresterea altor bacterii. Bulionul pentru cresterea microorganismelor (amplificare) este folosit pentru esantioanele cu un numar mic de bacterii, cum este lichidul de
dializa peritoneala, LCR sau esantioane in care pot fi prezenti anaerobi. Doua strategii de baza sunt folosite pentru izolarea agentilor patogeni bacterieni. Prima foloseste medii imbogatite pentru a permite cresterea oricarei bacterii care poate fi prezenta intr-un esantion de sange sau LCR. Deoarece
bacteriile nu sunt prezente in astfel de fluide in conditii normale, depistarea microorganismelor este de obicei importanta. Bulionul care permite cresterea unui numar mic de microorganisme poate fi subcultivat pe medii solide cand este depistata prezenta acestora. A doua este de a izola (a amplifica) specii bacteriene caracteristice din scaun, secretiile tractului genital sau sputa, care contin un numar mare de bacterii, in conditii normale. In acest scop se incorporeaza in mediul de agar agenti antimicrobieni sau alte substante inhibitorii pentru a impiedica cresterea bacteriilor, cu exceptia celor care ne intereseaza. Dupa incubatie, organismele care cresc pe astfel de medii sunt studiate pentru a se determina daca sunt agenti patogeni. Selectarea microorganismelor care pot fi agenti patogeni din flora normala scurteaza timpul necesar silirii diagnosticului.
Izolarea agentilor rali (modulul 182) Agentii patogeni rali sunt cultivati deseori atunci cand prezenta anticorpilor nu este un criteriu pentru silirea diagnosticului de infectie activa sau cand nu poate fi detectata o crestere a anticorpilor serici in timpul infectiei. Semnalul biologic, rusul, este astfel amplificat pana la un nivel la care se poate face detectarea. Desi sunt disponibile o serie de tehnici, elementele esentiale includ o cultura de celule de mamifere in mono strat, celule sensibile la infectia cu agentul patogen ral suspectat. Aceste celule servesc ca sistem de amplificare prin faptul ca permit proliferarea particulelor rale. Virusul poate fi detectat prin observarea directa a celulelor cultivate in vederea depistarii efectelor citopatice sau prin detectarea imunofluorescenta a antigenilor rali, dupa incubatie. Metodele de cultivare sunt deosebit de utile pentru detectarea agentilor ce se proa rapid, cum sunt rusul citomegalic si rusul
herpes simplex.